【实验目的】

  通过SDS-PAGE法分离表达蛋白，鉴定表达蛋白的分子量和表达水平。
【实验材料】

  经过诱导表达的菌液

【试剂与器材】

  Tris-HCl（pH8.9）：Tris 36.3g，用适量水溶解后，用HCl调pH到8.9，再定容至100ml；

  30％Acr-Bis：30gAcr，0.8gBis，用蒸馏水溶解后再定容至100m1，在4℃可存放数月；

  10%SDS；

  TEMED：原液；

  10%AP；

  Tris-HCl（pH6.7）：Tris l2.10g, 用适量水溶解后，用HCl调pH到6.7，再定容至100ml；

  考马斯亮蓝染色液：1.0g考马斯亮蓝R-250，500ml甲醇,100ml冰醋酸，用水定容至1L；

  2×SDS上样缓冲液：0.1mol/L Tris(pH6.8)，4%SDS，20％甘油，0.02％溴酚蓝，4%β-巯基乙醇，4℃保存；

  脱色液：50ml甲醇，75ml醋酸，定容至1L；

  10×电极缓冲液：6g Tris，28.8g Glycine，l0g SDS，用适量水溶解后调pH至8.3，再定容至1L；

  蛋白Marker。

  蛋白电泳槽；pH计；金属自动恒温加热器；常温摇床；微量移液器；电泳仪。

【实验思考题】

  1,SDS在SDS―PAGE中的作用?在质粒DNA提取中又起什么作用?

  2.SDS一PAGE中蛋白质样品上样前,加入上样缓冲液要在100℃沸水浴中保温10min,这是为什么?

  3,简要说明蛋白质电泳的三大效应?

  4.蛋白质电泳制胶要注意哪些方面?

  5.蛋白质电泳上样缓冲液中各种试剂的作用是什么?

6.比较核酸电泳与蛋白质电泳的异同之处。