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基因工程技能训练

《基因工程技能训练》课程教学大纲

来源：浙江大学生物学国家级实验教学示范中心

时间：2023-03-23 03:43:35

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课程名称：  基因工程技能训练
实验课性质：独立设课
课程编号：  07120200
一、学时、学分
课程总学时：96学时  实验学时：96学时
课程总学分：3学分   实验学分：3学分
二、适用专业及年级
生物、生仪、城市学院等，三年级学生
三、实验教学目的与基本要求
  随着分子生物学的迅猛发展，基因工程方法技术已广泛渗透到现代生命科学的各个分支领域，成为生物工程的核心技术。本教学大纲根据基因工程研究的发展趋势，结合基因操作技术和分子生物学研究工作中经常使用的基本方法和技术以及从自然界中克隆基因的基本思路编写而成的。
  通过《基因工程实验》的学习，使学生了解基因工程的四大要素，知晓从自然界的生物中克隆所需目的基因的基本思路和策略，启发学生的思维，让学生熟悉从最基础的核酸、质粒的提取开始，到基因分离方法的确定、基因的克隆、鉴定、表达以及最终能获得目的基因的表达产物的整个过程。使学生对基因工程有一个全方位的、比较系统的认识。通过一系列实验，加强学生动手能力，提高基本操作技能，使学生具备从事分子生物学教学和科研的基本能力。
本课程共96学时，安排在大三暑假短学期，进行为期十天的集中学习与实验训练。
四、主要仪器设备
  低温台式离心机（eppendorfcentrifuge5417R）2台；台式离心机（eppendorf）3台；落地式高速离心机1台；高压蒸汽消毒锅(LDZX-40BI)全自动1台；PCR仪器98孔1台；电子秤MettlerToledoPB2002-NMax2100g1台MettlerToledoAB204-E0.1mg1台；DNA电泳仪、电泳槽、制胶板5套；微量移液器10、2-20、20-200、100-1000各15支、微量移液器50001支；DNA电泳凝胶成像系统胶1台；紫外投射反射分析仪（ZF型）1台；恒温水浴（16℃）1台；制冰机（AF-200）1台；超净台（有紫外灯）2个；生化培养箱4台；冰箱（四星级）3台；蛋白质电泳槽、制胶板（bio-rad）5套；蛋白电泳仪2台；纯水器（重蒸水制备用）1套；微波炉2台；干燥箱2台；水浴涡3台；恒温摇床3台；超声波清洗机1台；旋涡振荡器15个；台式脱色摇床5台；分光光度机2台；核酸凝胶转移装置5个；核酸杂交仪1台；pH计1台；超声波破碎仪1台；-70℃冰箱1台。
五、实验课程内容和学时分配
序号
实验项目名称
实验内容
学时分配
实验属性
实验
类型
每组人数
1
DAN提取
染色体DNA提取、核酸电泳
8
技术（专业）
基础类
综合性
2
2
PCR反应
PCR扩增、电泳、提纯、电泳
12
技术（专业）
基础类
综合性
2
3
质粒提取
质粒提取、电泳
8
技术（专业）
基础类
综合性
2
4
核酸酶切
PCR产物与质粒酶切、电泳、
割胶、过柱纯化、电泳
12
技术（专业）
基础类
综合性
2
5
重组质粒的
构建、转化
PCR与质粒的连接、感受态细胞
制备、重组质粒的转化
12
技术（专业）
基础类
综合性
2
6
阳性克隆的
筛选
抗生素与蓝白板筛选、重组质粒的
提取、酶切、电泳确认
16
技术（专业）
基础类
综合性
2
7
基因表达
阳性克隆株的培养与诱导表达、
SDS-PAGE检测
16
技术（专业）
基础类
综合性
2
8
Southern
杂交实验
染色体DNA酶切、电泳、DNA变
性、转膜、探针标记、杂交、显色
12
技术（专业）
基础类
综合性
2
此课程是一个系列、综合性的大实验，在暑假短学期连续10填完成、由一位主讲教 师（教师或教授）负责；二人一个实验组，但实验材料人手一份、操作各自进行。
六、考核方式
（1）实验报告：要求按照杂志上发表论文的格式即封面（标题、姓名、学号、指导教师、时间）、目录、摘要、前言、材料与方法、结果、讨论与参考文献了进行撰写。
（2）考核方式：
  a.实验课的考核方式；一套试题库，包含了一些基本的实验操作、仪器的使用、实验中的注意事项以及一些课堂上讲解过的理论问题，并以多媒体的试题形式出现在考场上，同学可以自由上台，随机选题目进行口头解答或当场演示。
  b.实验课考核成绩确定：平时的个人实验及操作占40%、公共实验的参与占10%、实验结果占10%、实验报告占25%与最后的实验考试占15%。
七、实验教科书、参考书
（一）教科书
朱旭芬 《基因工程实验指导》北京：高等教育出版社，2006年
（二）参考书
奥斯伯. F等《精编分子生物学实验指南》北京：科学出版社，1998年
萨姆布鲁克. J等《分子克隆实验指南》北京：科学出版社，1998年