【实验目的】

  学习与掌握阳性克隆的筛选方法，了解抗药性筛选和α-互补筛选的原理。学习电泳法筛选鉴定重组质粒的方法。
【实验材料】

  待筛选平板

【试剂与器材】

  Amp：用无菌水配制成100mg/ml母液，置-20℃冰箱保存。工作浓度100ug/ml；

  LB培养基：1%蛋白胨，0.5%酵母提取物，1%NaCl，用NaOH调pH到7.2，121℃灭菌20min备用。固体LB培养基则在LB液体培养基中添加1.5%～2%琼脂，灭菌后备用；

  提取质粒的试剂；

  酶切试剂：工具酶HindIII，BamHI；

  核酸电泳试剂。

【实验思考题】

  1.如何进行转化子的接种操作?

  2.在用质粒载体进行外源DNA片段克隆时主要应考虑哪些因素?

  3,利用α互补现象筛选带有插人片段的重组克隆的原理是什么?

  4.质粒转化后,如何挑菌落接种进行阳性克隆的筛选?

  5.蓝白筛选中,蓝色菌落最有可能含有重组子?还是白色菌落最可能含有重组子?为什么?

  6.要进行转化子的蓝白筛选,对宿主、质粒有什么要求?