【实验目的】

  将重组DNA导入宿主细胞，使其获得新的遗传性状。利用CaCl₂法制备大肠杆菌的感受态细胞，用于重组质粒的转化。
【实验材料】

  大肠杆菌DH5a

【试剂与器材】

  CaCl₂溶液_：60mmol/L CaCl₂，15%甘油，pH7.2，4℃保存。

  X-gal：2%母液（用二甲基甲酰胺配制，包以铝箔或黑纸以防止受光照被破坏，-20℃保存备用），工作浓度20ul/20ml平板；

  氨苄青霉素(Amp)：用无菌水配制成100mg/ml母液，置-20℃冰箱保存。工作浓度100ug/ml；

  IPTG：母液100mmol/L，-20℃冰箱保存。工作浓度40ul/20ml平板；

  LB液体培养基：1%蛋白胨，0.5%酵母提取物，1%NaCl，用NaOH调pH到7.2，121℃灭菌20min备用。固体LB培养基则在LB液体培养基中添加1.5%～2%琼脂，灭菌后备用；

  含Amp的LB固体培养基：将配好的LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右，加入Amp储存液，使终浓度为100ug/ml，摇匀后铺板；

【实验思考题】

  1.如何制各平板?

  2.当质粒加人宿主细胞进行转化,再涂布在含有Amp的LB培养基平板前,为什么要在LB培养基中培养1h?

  3.在涂板时,不小心将放三角刮刀烧杯的乙醇点燃了,应该如何处理?

  4.什么情况下转化平板上会出现卫星菌落?