【实验目的】
1. 学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；
2. 学习纸层析的原理和操作技术。

【主要仪器】

1. 研钵

2. 康氏皿

3. 恒温水浴箱（37℃、100℃）

4. 喷雾器

5 毛细管（直径0.5mm)

6 新华定性滤纸（直径11cm）

7 电吹风

【试剂与材料】
1. 动物肝脏(牛蛙肝或猪肝）

2 . 0.01mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）（转氨基反应所需缓冲溶液）；

3.  0.1mol/Lα－丙氨酸（pH7.4）（转氨基反应的底物，纸层析的标准样品）；

4.  0.1mol/Lα－酮戊二酸（pH7.4）（转氨基反应的底物）；

5.  0.1mol/L谷氨酸（pH7.4）（纸层析的标准样品）；

6 . 展层溶剂－酚溶液：水饱和酚：冰乙酸（300：1）（纸层析用）；

7 . 10％三氯乙酸（终止酶促反应，使转氨酶及其它蛋白质变性、沉淀）；

8.  0.25%碘乙酸（抑制L－谷氨酸脱氢酶活性）；

9. 显色剂（0.1%茚三酮-乙醇溶液）。

【实验内容】
1. 转氨酶液的制备
    取新鲜牛蛙肝或猪肝约3g，剪碎用研钵将肝脏碾碎，加3ml磷酸缓冲液迅速碾磨，加9ml磷酸缓冲液，用两层纱布过滤，收集浆液或滤液即得转氨酶提取液备用。
2. 氨基移换反应
   取4支洁净、干燥的试管，按下表操作
 

3. 层析
（1）准备：
①取新华定性滤纸（直径11cm）一张，找出圆心，用圆规画一直径2 cm的细圆圈（保持干净），并用铅笔作出点样位置。找出圆心，用铅笔尖在圆心处截一小孔（孔径约0.2cm)。
②另取2cm×3cm滤纸，先将下端剪成须状，卷成“灯芯”，备用。
（2）点样：用毛细管依次点标准α－丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)各点2次，其余1－4号管样液各点2～3次。点样时，要待前次点样干燥（可用电吹风吹干）后方可再次点样，点样直径不超过0.3cm。
（3）展层、显色
    将下端剪成须状,卷成的“灯芯”，然后将上端插入层析滤纸圆心处的小孔中, 平放在盛有展层溶剂的康氏皿中,使“灯芯”下端须状浸入展层溶剂中,再在滤纸上盖上另一康氏皿（图1）。展层剂沿灯心上升到滤纸,再向四周扩散,待溶剂前沿距康氏皿外槽内缘0.5cm(约需半小时)，取出滤纸，用镊子拔出灯心，滤纸用电吹风吹干，再用喷雾器向滤纸均匀喷洒0.1%茚三酮－乙醇溶液，用电吹风热风吹干或放入烘箱（80 ℃）中显色3min。

 
【实验记录与报告】