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细胞生物学及实...

实验六 植物细胞骨架的制片及光学显微镜观察

来源：浙江大学生物学国家级实验教学示范中心

时间：2023-04-13 14:56:50

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一、实验目的
 掌握细胞染色的基本过程及非切片法制片技术，了解细胞骨架的结构
二、材料、器材与试剂
2.1 材料
新鲜洋葱鳞茎，撕取内表皮，切成约0.5cm×0.5cm大小。
2.2 器材
光学显微镜、精确天平、0.02ml移液枪、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
2.3 试剂：
  • M-缓冲液：50mmol/L咪唑、50mmol/LKCl、0.5mmol/LMgCl2、0.1mmol/LEDTA、1mmol/LEGTA[乙二醇双（α-氨基乙基）醚四乙酸]、1mmol/L巯基乙醇。
  • 6mmol/LPH6.8磷酸缓冲液：0.2149g Na2HPO4·12H2O、0.0816g KH2PO4 加入100ml 蒸馏水。
  • 1％TritonX-100：0.5ml 100％TritonX-100加入A液49.5ml。
  • 0.2％考马斯亮蓝R250：0.2g考马斯亮蓝R250粉加入甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml。
  • 3％戊二醛：6ml 25％戊二醛加入B液44ml。
三、实验主要内容
1 取材：洋葱鳞茎内表皮
2  TritonX-100处理
3  戊二醛固定
4  考马斯亮蓝R250染色
5 制片与观察
6 画图和摄像
四  作业
1．记录并图绘实验结果
2．试说明实验中各试剂的作用