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免疫学技术

实验四 巨噬细胞分离与功能测定

来源：浙江大学生物学国家级实验教学示范中心

时间：2023-04-13 14:40:40

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一、材料： 
1．无菌生理盐水，Hank’s液，8%淀粉肉汤液，瑞氏染液
2．5ml无菌注射器，离心管，载玻片，烧杯，镊子，吸管，解剖剪，水浴锅
3．1%鸡红细胞悬液
4．小鼠  
    8%的淀粉肉汤:
    将0.3g牛肉膏、1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠放入100 ml蒸馏水中，加热后加入可溶性淀粉8.0g，溶解后煮沸灭菌，置4℃冰箱保存。 
二、方法（体外） 
1.实验前三天，给小鼠腹腔注射8%淀粉肉汤液1ml。
2.实验当天，给小鼠腹腔注射3～4ml Hank’s液，轻揉腹部，令其活动10min。
3.小鼠断颈处死后，常规腹部消毒，左手持镊子提起腹下部皮肤，右手用解剖剪剪开一个小口，由下向上撕开皮肤，暴露腹腔。
4.提起腹前壁，剪开一个小口，用毛细吸管吸腹水，并收集于试管内。 
5.1500rpm离心10min， 弃上清，加0.5~1ml培养液悬浮细胞。
6.取1％鸡血0.1ml加入到巨噬细胞悬浮液中混匀，37°C水浴30-60min ，取1~2滴细胞悬液于载玻片。
7.观察结果（直接观察；自然干燥后，瑞氏染液染色，镜检）。  小鼠腹腔注射1％鸡血1ml，活动30～60min后，注射Hank’s液3～4ml，揉匀。
三、方法（体内）•
•小鼠腹腔注射1％鸡血1ml，活动30～60min后，注射Hank’s液3～4ml，揉匀。
•小鼠断颈处死后，取腹水，涂片。
•直接观察；或干燥后，瑞氏染料染色，镜检。