[目的要求]

1.学习离体肠段平滑肌的实验方法。

2.了解肠段平滑肌的生理特性。学习电生理学实验方法。

[基本原理]

哺乳动物消化管平滑肌与肌肉组织具有其共性，如兴奋性、传导性和收缩性等。但消化管平滑肌又有其特点，即兴奋性较低，收缩缓慢，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。这些特性可维持消化管内一定压力，保持胃肠等一定的形态和位置，适合于消化管内容物的理化变化，在体内受中枢神经和体液因素调节。将离体组织器官置于模拟体内环境的溶液中，可在一定时间内保持其功能。本实验以台式液做灌流液，在体外观察及记录哺乳动物离体肠段的一般生理特性。

[实验材料]

兔，恒温平滑肌槽，支架，烧杯，20ml注射器，张力传感器，生物机能实验系统，温度计，台式液，肾上腺素（1：10000），乙酰胆碱（1：10000），阿托品针剂

[方法与步骤]

1.启动恒温平滑肌槽  恒温平滑肌槽外部容器为恒温浴锅，应加蒸馏水至完全浸没加热棒。小管为平滑肌浴管。使用前将浴管刷洗干净，加入台氏液至浴管高度的2／3处，约50ml。开启电源加热，恒温工作点定在37℃，浴管温度将自动稳定在37℃左右.

2.制备离体兔肠段。用木槌猛击兔的后头延髓部或耳静脉注射空气，致其昏迷后立即剖开腹部，找出胃幽门与十二指肠交界处，用线结扎，在结扎线近胃侧剪断小肠，将肠管的肠系膜沿肠缘剪开，分离出长约20～30cm的肠管。把离体的肠管置于4℃左右的台氏液中，剪成数段，每段长2cm，然后用注射器向肠腔内注入台氏液，冲洗肠腔，待肠腔内容物基本洗净后，放入4℃台氏液中备用。

3.建立实验系统

（1）标本与张力换能器连接  取一段长2cm的肠段，一端固定于浴管底部的小钩上，另一端用手术线连接固定于肌张力换能器的应变簧片上。将标本浸置于含37℃台氏液的浴管中。

（2）通过调整使肠管及其连线有一定的紧张度，即有一定的前负荷，一般前负荷为1~4g。肠段勿牵拉过紧或过松。肠段勿与周围管壁接触，以免磨擦。

（3）供氧气  调节调气阀，以控制气流量，让通气管的气泡一个一个的溢出，为台氏液供氧。

4. 实验观察

（1）打开生物机能实验系统，记录肠段的运动曲线

（2）记录对照肠段运动曲线后，停止供气1min并记录曲线变化，同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后，立即恢复供气。用新鲜37℃台氏液冲洗，待恢复正常（注意做好标记）。

（3）记录对照肠段运动曲线后，加入25℃台式液，并记录曲线变化，同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后，立即用37℃台式液冲洗，待恢复正常。

（4）同法加入45℃台氏液并记录曲线变化，同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后，立即用37℃台式液冲洗，待恢复正常。（以上流出液中未加入药物，可以回收使用，以下加入药物的流出液不可再用）

（5）同法加入2滴肾上腺素，观察并记录曲线变化。

（6）同法加入乙酰胆碱，观察并记录曲线变化。

（7）加入3滴阿托品后加入与（6）同剂量的乙酰胆碱，观察并记录曲线变化。

（8）选择CaCl₂、HCl、NaHCO₃、乙醇、枸橼酸莫沙必利或茶多酚等，自主设计实验，研究其对离体小肠节律性活动的影响。

[注意事项]

1.加药前必须准备好更换用的37℃台式液。上述药物剂量只是参考，效果不明显可补加，每次加药出现效果后，必须立即更换浴槽内的台式液并冲洗3次，待肠肌恢复正常后在观察下一项目。浴槽内台式液要保持一定温度。

2.游离及取出肠段时，动作要快，取兔肠及兔肠穿线时尽可能不用金属及手指触及。为保持离体肠段的活性，可先遇冷充氧的营养液，游离肠段及穿线在预冷的营养液中进行。实验中始终通气。

[思考题]

1.进行哺乳动物离体组织器官实验时，需控制哪些条件？

2.为什么加入各种药物会引起离体肠段活动的变化？其机制是什么？

3.加入阿托品后再加入乙酰胆碱，肠段活动受到什么影响，为什么？