【实验目的】

1．学习斯氏离体蛙心灌流法。

2．了解心肌的生理特性。

3．观察Na⁺、K⁺、Ca²⁺、H⁺及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。

【实验动物与器材】

蛙、斯氏蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、5g张力换能器、滴管、培养皿（或小烧杯）、污物缸、纱布、棉线、任氏液、0.65％NaCl、2％CaCl₂、1％KCl、2.5%NaHCO₃、3%乳酸、1:5000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、300 U／ml肝素；药物A、B、C。

【实验方法与步骤】

1．仪器准备

打开计算机采集系统，张力换能器输入通道1。从多道生理信号记录与分析软件的“编辑”菜单，弹出“编辑实验标记”对话框，在“标记内容”中加入“对照、换液、0.65％NaCl溶液、2％CaCl₂溶液、1％KCl溶液、2.5%NaHCO₃、3%乳酸、肾上腺素、乙酰胆碱、药物A、药物B、药物C”。再从“实验”菜单的“机能实验”中，选定“化学因素对心脏活动的影响”实验。

2．用斯氏蛙心插管法制备离体蛙心

取一只蛙，双毁髓后背位置于蛙板上。暴露心脏，小心剪开心包膜，仔细识别心脏周围的大血管。在右主动脉下穿线并结扎。在左主动脉下方穿一线并结扎（动物个体小时，结扎位置可靠上些）。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起左主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口（在左主动脉剪口前，应先用蛙心插管的细端置动脉球处与动脉平行来选择适宜的剪口）。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量（套管内2～3 cm高度）任氏液（内加入一滴肝素溶液）的斯氏蛙心套管，由开口处插入动脉圆锥。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，并将套管向右主动脉方向转动，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插人心室腔内（于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口）。此时可见套管中血液冲入套管，并使液面随心脏搏动而上下移动，表明操作成功（否则需退回并重新插入），用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧（不得漏液），再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体（切勿损伤静脉窦）。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致（1.5～2 cm），即可进行实验。

3．将插好离体心脏的套管固定在支架上，在心室舒张期用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉（不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液）。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与10g张力换能器相连。注意：勿使灌流液滴到换能器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。

4．实验观察

（1）记录正常心搏曲线。

（2）改用0.65％NaCl溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2~3次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致（以下同）。

（3）同法向套管内加入2％CaCl₂溶液，每次加入20μl，观察并连续记录每次加入CaCl₂后心搏曲线的变化。当出现明显变化时，用新鲜任氏液更换灌流液，待心搏恢复正常（如果恢复迟缓，可多次冲洗）。

（4）向套管中加1％KCl溶液，每次加入20μl，观察并连续记录每次加入KCl后心搏曲线的变化。当心搏曲线出现明显变化时同法立即更换灌流液，待心搏恢复正常。

（5）向套管中加2.5% NaHCO₃溶液20μl，记录心搏曲线变化。更换任氏液，待心搏恢复正常。

（6）向套管中加3%乳酸10μl，记录心搏曲线变化。待效应明显后，再加2.5% NaHCO₃溶液40μl，记录心搏曲线变化。用新鲜任氏液清洗。

（7）向套管中加入40μl 肾上腺素溶液（1：5 000），记录心搏曲线的变化。用新鲜任氏液清洗。

（8）向套管中加入20μl滴乙酰胆碱溶液（1：10 000），记录心搏曲线的变化。用新鲜任氏液清洗。

5．药效研究

有A、B、C三种药物，一种是去乙酰毛花苷注射液，为强心剂；一种是硝苯地平，为钙离子通道阻滞剂；一种是盐酸普萘洛尔，是β受体阻断剂。通过实验判断A、B、C分别是哪种药物。

6．整理记录，并将测量的心搏曲线数据填入表。

【实验注意事项】

1．制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。

2．蛙心插管内液面应保持恒定，以免影响实验结果。

3．上述各实验项目，一旦出现作用应立即用新鲜任氏液换洗，以免心肌受损，而且必须待心跳恢复正常后方能进行下一步实验。

4．滴加药品和换取新鲜任氏液，须及时在相应位置标记，以便观察分析。

5．吸取新鲜任氏液和吸蛙心插管内溶液的吸管应严格区分专用，不可混淆使用，以免影响实验结果。

【思考题】

1.分析以上各实验结果及其原因。

2.本实验说明心肌的哪些生理特性?